Анализ RW: морально устаревший, но самый доступный и до сих пор применяемый метод диагностики сифилиса

В начале 20 века немецким иммунологом Августом Вассерманом была открыта серологическая реакция, которая до настоящего времени используется для диагностики сифилиса и носит его имя в виде аббревиатуры RW. Анализ крови на реакцию Вассермана входит в перечень обязательных исследований, которые проводят беременным женщинам и перед любыми хирургическими манипуляциями.

Особенности реакции Вассермана

Что это за анализ, объясняется с точки зрения иммунологии. Исследование проводится методом РСК – реакции связывания комплемента. Комплемент представляет собой группу специфических белков, которые участвуют в сложном каскаде иммунных реакции. Они являются частью врожденного и приобретенного иммунитета. Система комплемента неактивна до тех пор, пока ее не активирует чужеродный белок, вырабатываемый внедрившимися микроорганизмами.

Классический путь активации происходит после контакта с бактерией. На поверхности имеются собственные белки-антигены. Для человеческого организма они чужеродны, в ответ происходит выработка белков-антител. Комплемент необходим для стимуляции антител, а после образования комплекса с антигенами микроорганизм становится видимым для иммунных клеток-макрофагов. Они поглощают бактерии и способствуют выздоровлению.

При заражении бледной трепонемой, возбудителем сифилиса, в организме формируются антитела, которые сохраняются долгое время. По их концентрации можно определить фазу болезни, что и показывает RWанализ крови.

Для анализа Вассермана необходимы 5 компонентов:

• диагностируемый антиген;
• диагностические антитела;
• индикаторный антиген – эритроциты барана;
• индикаторные антитела – кроличьи гемолизины;
• комплемент.

Во время постановки реакции необходимы 2 системы антиген-антитело, одна из них – индикаторная, а вторая – специфическая. В норме взаимодействие антигена и антитела сопровождается связыванием комплемента, при этом формируется комплекс, который зрительно не заметен. Поэтому необходима индикаторная гемолитическая система. Сыворотка сенсибилизирует эритроциты, делает их чувствительными к действию комплемента. Поэтому в его присутствии происходит гемолиз – распад красных кровяных клеток, раствор окрашивается.

Расшифровка результатов RW анализа крови строится на основе выраженности гемолиза. Если раствор сохранил исходное прозрачное состояние, значит, весь комплемент связался со специфической системой. Это показатель появления комплексов антиген-антитело, что говорит о том, что в сыворотке крови есть антигены сифилиса, а к ним в организме выработались антитела. Такой результат положительный.

При отсутствии в крови специфических антител к антигену, не формируются их комплексы, а комплемент не активируется и остается свободным. Он связывается с индикаторными белками, вызывает гемолиз эритроцитов и смесь в пробирке окрашивается в красный цвет, что означает RW анализ крови отрицательный.

RW анализ крови проводится в лабораторных условиях при соблюдении стерильности. Используемые биологические материалы и кровь пациента проходят тщательную подготовку, их титруют в различных соотношениях с комплементом, добавляя от 0,5 до 0,05 мл этого белка. По интенсивности реакции в каждой пробирке судят о результатах реакции.

Кому рекомендуется исследование

Сифилис – это опасное инфекционное заболевание, которое передается половым путем. После заражения первые симптомы часто остаются незамеченными. В местах проникновения возбудителя появляются язвочки. У женщин они могут появляться во влагалище, на шейке матки, в области прямой кишки или во рту. Они не сопровождаются неприятными ощущениями, болезненностью или специфическими выделениями.

Если возбудитель оказался на коже паховой области, половых губ или промежности, то в этих же местах локализуются сифиломы. Язвы не сопровождаются зудом, не шелушатся и проходят самостоятельно бесследно. На их месте не формируется рубец или пигментация. Поэтому люди не обращаются к врачу.

Поэтому законодательно введен обязательный экспресс-анализ крови на RW, который проводят в следующих ситуациях:

• всем беременным при постановке на учет, а также незадолго до родов;
• перед любыми инвазивными процедурами, хирургическими операциями, в том числе малоинвазивными;
• во время обязательного профосмотра при трудоустройстве, а также ежегодных обследований.

У беременных обследование может проводиться дополнительно в середине срока вынашивания,  что связано с особенностями образования антител. Если женщина заразилась трепонемой незадолго до беременности или в начальном сроке, иммунитет не успеет среагировать, анализ будет отрицательным.

Врач-гинеколог направит на RW, если у женщины на осмотре обнаружится безболезненная язва на половых органах, увеличенные паховые лимфоузлы. На исследование направит врач-дерматолог или терапевт пациентов, которые обращаются с жалобами на увеличение лимфоузлов и язвы на половых органов, а также появление бледной сыпи по телу. Самостоятельно пройти обследование рекомендуется при случайных половых связях, но не ранее, чем через 3-4 недели после предполагаемого заражения. Это связано с особенностями иммунного ответа и инкубационного периода трепонемы.

Особенности течения сифилиса и образования антител

Сифилис относится к инфекциям, передающимся половым путем, заражение происходит при контакте выделений из половых путей больного человека и здорового. Для внедрения трепонемы достаточно ее попадания на кожу, поэтому первичные элементы часто появляются вокруг анального отверстия, на слизистой оболочке рта и в других местах, где происходило соприкосновение.

Инкубационный период может длиться от недели до 190 дней и зависит от индивидуальных особенностей иммунной системы. Он укорачивается у женщин, которые заразились одновременно из двух источников, но может увеличиваться, если на этапе размножения возбудителей проходило лечение антибиотиками другого инфекционного заболевания.

С момента появления твердого шанкра начинается первичный сифилис. В среднем он длится 6-7 недель и делится на 2 периода:

• серонегативный – анализ крови на RW, выполняемый микрометодом, и другие типы реакции будут отрицательны;
• серопозитивный – реакция Вассермана становится положительной, возникает через 3-4 недели после появления твердого шанкра.

Поэтому при обследовании пациентов с предположительным первичным сифилисом, или твердым шанкром, отрицательный RW – повод повторить анализ через несколько недель. Ретроспективно можно установить давность заражения, отследить половые контакты или обнаружить полового партнера, который стал источником инфекции.

Разделение на серонегативный и серопозитивный периоды в настоящее время используется редко, т. к. появились современные методы диагностики, при которых возбудителя, его ДНК или антитела можно обнаружить уже через несколько недель после заражения.

Вторичный сифилис развивается через 6-7 недель после первичного. Возбудитель гематогенно распространяется по организму, поражает внутренние органы, а на коже появляется сыпь. Это период делят на три других:

• ранний, или свежий – первичное высыпание на коже, в организме уже выработаны антитела;
• рецидивный – высыпания появились повторно из-за ослабления иммунной защиты;
• латентный – болезнь переходит в скрытую форму, которая внешне не проявляется.

Третичный сифилис развивается через много лет существования болезни без лечения. В настоящее время из-за широкого распространения антибиотиков и всеобщей диагностики встречается очень редко. Для него характерно поражение нервной системы, костей, хрящей, внутренних органов.

Образование антител происходит поэтапно. На раннем этапе болезни появляются IgA, после появления твердого шанкра обнаруживаются IgМ, и еще через некоторое время IgG. Особенность течения болезни в том, что при третичном сифилисе иммунный ответ становится очень слабым и антитела могут не определяться при анализе RW.

Как подготовиться к исследованию и что влияет на точность анализа

Перед тем, как сдавать анализ, необходимо получить направление от врача. Исследование не проводится анонимно, т. к. сифилис относится к заболеваниям, которые требуют обязательного установления половых контактов и лечения сексуальных партнеров. Это сдерживающая мера, направленная на остановку распространения болезни.

Специальная подготовка к анализу не требуется. Для обнаружения антител не имеет значение, натощак или нет берут кровь, но врачи рекомендуют утром не принимать пищу, а вечером отказаться от алкоголя и жирной еды. Это стимулирует работу печени, выброс желчи в просвет кишечника и увеличение уровня липидов в крови. При попытке получить сыворотку обнаружится хилез, который не позволит провести анализ.

При беременности женщине также не рекомендуется принимать пищу, но разрешается выпить воды. Если состояние голода плохо переносится, необходимо взять в поликлинику конфету или шоколад, чтобы съесть сразу после сдачи крови.

Забор биологического материала

Для классического анализа RW требуется сдать венозную кровь. Чаще всего ее берут из локтевого сгиба, но допускаются и другие доступные сосуды. Вена, откуда берут кровь, предварительно пережимается жгутом выше места прокола. Пациента просят сжимать и разжимать кулак, чтобы усилить приток крови из артерий. Лаборант обработает кожу раствором антисептика и наберет в стерильный шприц 5-10 мл крови.

Для дальнейшего исследования из крови получают сыворотку, это нужно сделать в кратчайшие сроки, чтобы не произошла активация фибриногена и свертывание. Поэтому форменные элементы осаждаются, а после добавления ионов кальция фибриноген становится неактивным. Антитела при этом никуда не исчезают, поэтому биологический материал пригоден для анализа.

Результаты реакции Вассермана

Срок проведения анализа RW около суток. Современные методы исследования, которые постепенно заменяют реакцию Вассермана по времени готовности приблизительно одинаковы. Но другие методы исследования дают точный результат уже на раннем этапе появления антител или позволяют выявить ДНК возбудителя, поэтому кровь на RW берут реже.

При плановом обследовании перед операцией необходимо учитывать, сколько действителен анализ крови на RW, чтобы в день госпитализации не пришлось проводить повторное обследование и ждать его результатов. Срок действия анализа 2 месяца, как и обследования на ВИЧ и гепатиты. Но в случаях, когда анализ сдается при предоперационной подготовке, врачи рекомендуют сдавать его за месяц до предполагаемой даты операции или манипуляции, чтобы при положительном результате можно было пройти лечение и повторное исследование.

Положительный результат

Сколько делается анализ крови на RW, зависит от особенностей лаборатории, но чаще всего результат готов на следующий день. Исследование направлено на определение суммарных иммуноглобулинов класса M и G, только в этом случае получается положительный результат. Но в заключении можно обнаружить различные значения, которые определяют количеством знаков «+» в количестве от 1 до 4. Чем больше плюсов, тем сильнее реакция Вассермана, тем больше антител у больного.

В кожно-венерологическом диспансере, куда нужно обращаться при положительном результате, назначат дополнительные исследования, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз. Поэтому при получении положительного ответа при первичном исследовании,  не стоит паниковать, это еще не означает болезнь.

Положительный анализ на RW появляется в следующих состояниях:

• при свежем сифилисе, или в первичный серопозитивный период;
• при вторичном серопозитивном сифилисе, если заражение произошло больше 3 месяцев назад;
• при третичном сифилисе в серопозитивный период;
• если с момента лечения прошло меньше года;
• при серорезистентности после лечения болезни.

Анализ крови на RW применяют не только для диагностики сифилиса, но и антифосфолипидного синдрома. Это заболевание, которое чаще возникает у женщин и характеризуется образованием антител к фосфолипидам. Они атакуют эмбрион, что приводит к привычному невынашиванию беременности и самопроизвольным выкидышам в раннем сроке. Но кровь на RW можно сдавать для диагностики антифосфолипидного синдрома, если подтверждено отсутствие сифилиса.

Отрицательный результат

В бланке ответа лаборатории может быть указано, что результат отрицательный, что означает отсутствие антител. Но, учитывая особенности патогенеза болезни и этапы формирования антител, такое заключение не всегда показатель здоровья.

Если сдавать анализ в первые 3-4 недели после полового контакта, во время которого могло произойти заражение, в организме есть только иммуноглобулины класса А, которые не определяются во время анализа на RW. В раннем серонегативном периоде, когда уже есть первые симптомы болезни, также отсутствует полный набор антител, необходимый для положительного результата. Поэтому пациентам с подозрением на сифилис, но отрицательным результатом исследования назначаются дополнительные тесты или повторное обследование через несколько недель.

Отрицательный результат может быть в случае, когда у человека развился третичная стадия патологии. В этом случае имеются выраженные характерные признаки поражения:

• нервной системы;
• аорты и других крупных сосудов;
• спинного мозга;
• костей и мышц;
• слизистых оболочек;
• эпидермиса.

У таких пациентов страдает память, внимание и мышление. Диагностика третичного сифилиса по результатам анализов затруднена.

Ложный результат

У взрослых анализ RW, который дал положительный результат, не всегда говорит об инфекции. Существует понятие ложноположительного исследования, которое связано с особенностью перекрестного реагирования антител. Ложный RW может наблюдаться в следующих состояниях:

• при беременности;
• у больных сахарным диабетом;
• при туберкулезе;
• у больных раковыми заболеваниями;
• у страдающих хроническим алкоголизмом;
• при инфекционном мононуклеозе;
• поражении печени вирусными гепатитами;
• при пневмонии;
• у больных аутоиммунными заболеваниями;
• у наркоманов;
• при подагре;
• после заражения энтеровирусом;
• после недавней вакцинации.

Эти состояния или заболевания характеризуются напряжением иммунной системы, формированием большого количество антител, которые способны прореагировать с комплементом при анализе RW. Поэтому пациентам с ложноположительным результатом необходимы дополнительные обследования. У беременных при получении положительного RW проводят тестирование другим способом. Иногда ложноположительный результат получают при инфицировании другими типами трепонем, которые не относятся к возбудителям сифилиса.

Альтернативные методики исследования

Реакция Вассермана читается устаревшим методом исследования, поэтому используется редко. На смену ей пришли другие, более точные способы, их условно называют анализ RW 2, или экспресс-метод. В некоторых клиниках в бланках продолжают называть исследование на сифилис RW, вне зависимости от типа используемой реакции.

Все методы обнаружения сифилитической инфекции разделяют на прямые, которые позволяют обнаружить бледную трепонему, и непрямые, основаны не поиске антител к возбудителю. На ранних этапах, когда у человека имеется изъязвленный твердый шанкр или высыпания на коже, получить образец можно из патологических очагов. Исследование можно провести тремя способами:

1. ПЦР – метод позволяет обнаружить ДНК возбудителя, а при применении ПЦР в режиме реального времени, отражается количество микроорганизмов. Но для постановки диагноза достаточно получить подтверждение присутствия микроорганизма. Исследование неэффективно при третичном сифилисе.
2. Темнопольная микроскопия – направлена на обнаружение живых трепонем в исследуемом материале. Лаборант может увидеть характерную по форме спиральную микробную клетку, которая совершает поступательные движения, достоверность способа 100%, но результат не получится, если в материале присутствует кровь, гной или в очаге выраженное воспаление.
3. RIT-тест – биологическая дорогостоящая проба, для проведения которой материалом от больного человека заражают лабораторных животных, результат исследования ждать несколько недель, поэтому исследование не используется для раннего скрининга.

По приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации для диагностики сифилиса необходимо использовать следующие методы:

1. Микрореакция преципитации – наиболее простой и быстрый способ исследования, который заключается в образовании иммунных комплексов с антителами в крови пациента, они выпадают в осадок в виде белых хлопьев.
2. РПГА – реакция прямой гемагглютинации, норма чувствительности метода 100%, но при воспалительных заболеваниях может быть ложный результат.
3. РИФ – иммунофлуоресценция, проводится с мечеными антителами, на практике применяется редко из-за высокой стоимости.
4. РИБТ – иммобилизация бледных трепонем, дорогостоящее исследование, используется в редких случаях.
5. ИФА – иммуноферментный анализ, незатратный и высоко специфический способ диагностики, иногда дает ложные результаты, в таком случае поводится повторное исследование.

В обязательный перечень не входит реакция иммуноблотинга. Метод диагностики применяется в сомнительных случаях, когда требуется углубленное исследование. Для получения результата требуется серия продолжительных реакций, поэтому анализ готовится около 7 дней.

Исследование крови при помощи RW позволяет диагностировать сифилис и начать лечение, для которого применяется пенициллин. Этот способ обследования постепенно приобретает исторический характер, а на его место приходят современные и быстрые экспресс-тесты.

Читайте также: Анализы на сифилис